Primera sesión. Martes 18 de febrero

En la primera sesión hemos recibido mucha información sobre las líneas de trabajo de IDForest y sobre el mundo Fungi. Hemos conocido más a fondo el instrumental y los laboratorios con los que cuenta la empresa, así como hemos aprendido a utilizar algunos de ellos.

Más específicamente hemos aprendido a identificar las esporas de la trufa negra y sus micorrizas de manera teórica y después práctica.

LÍNEAS DE TRABAJO

La empresa IDForest se centra fundamentalmente en tres líneas de trabajo, aunque no se cierra puertas a nuevas propuestas. Las líneas principales son:

·         1ª LÍNEA: Tuber melanosporum (trufa negra) micorrizada con Quercus ilex (Encina): La trufa se micorriza* con la encina. Se comprueban que las esporas y las micorrizas pertenecen realmente a la trufa negra realmente, pues las diferencias con otras son abismales (tanto gastronómicas como económicas)

·         2ª LÍNEA: Boletus edulis micorrizada en Cistus ladanifer (Jara pringosa): Las Boletus se micorrizan con las jaras, y tardan en fructificar de 5 a 6 años.

·         3ª LÍNEA: Lentinus edodes, conocida como Shiitake, un hongo sapófito* con propiedades medicinales que ya se ha dado a conocer en revistas generalistas.´

Cada hongo se cultiva de distinta forma:

·         Boletus edulis: Para cultivarlo hay que aislar el micelio puro, con sus sutratos, nutrientes…

·         Tuber melanosporum: Sólo hacen falta sus esporas, las cuales se extraen del cuerpo fructífero.

·         En los hongos saprófitos sólo se puede usar el micelio. Si se usan las esporas se contamina el medio.

La empresa de Venta de baños está dividida en varios laboratorios:

LABORATORIO ÓPTICO

En él se encuentran el microscopio, la lupa y un ordenador en el que se puede ver lo que estás aumentando con los dos primeros instrumentos.

Hay además una máquina llamada “Real Time PCR”, que  aumentando la cantidad de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa, permite identificar el hongo (o cualquier otro ser vivo) del que se trata. Si quieres averiguar si en un suelo hay o no el micelio que buscas, lo preparas y en una hora más o menos no solo tienes ese resultado, sino que también lo cuantifica.

Hay otros instrumentos, como una nevera, en la que se guardan algunas preparaciones.

Tuber melanosporum: TRUFA NEGRA

Hoy en este laboratorio nos han enseñado tres trufas negras que Jaime y su compañera Olaya Mediavilla, (jefa de laboratorio y acabando su tesis doctoral, que ha estado con nosotros las tres horas) han traído de la feria de la trufa de Soria en Abejar. Las Tuber melanosporum son negras por dentro y por fuera, y si las partimos a la mitad el aspecto nos recuerda al del cerebro. Su olor es fortísimo, de hecho, hemos podido olerlas cuando hemos entrado en el laboratorio (y se encontraban envueltas dentro de un tuper). En cuanto a si nos gustaba cómo olía o no, había discrepancias. Todos coincidíamos en que es un olor completamente distinto al resto, nunca habíamos olido nada parecido. Todas estas características son las que hacen que esté tan cotizada, y que además, con una sola trufa se puede dar sabor a muchísimos platos, se puede trufar* cualquier alimento.

Hay más tipos de trufa, como la Tuber aestivum o la Tuber indicum (o trufa china). Es muy importante saber identificarlas bien, pues tanto su calidad organoléptica como su precio varían abismalmente.

Por ello, hemos aprendido a identificar las esporas de la trufa negra, y el tipo de micorriza que forma con las raíces de los árboles. El precio de una encina de unos 10-15 cm de alto varía de 60 céntimos sin estar micorrizada por la trufa negra a unos 6€ estándolo. Muchos viveristas envían a IDForest pequeñas encinas antes de plantarlas para comprobar si están o no micorrizadas, y por tanto, si van a dar (grandes) beneficios.

·         IDENTIFICACIÓN DE ESPORAS

Para ver e identificar una espora es necesario utilizar el microscopio. Primero se prepara: Se coge un poquito de trufa triturada mezclada con agua, o un trocito muy pequeño de trufa a la que se le añade una gotita de agua una vez colocado en el porta. Se coloca un cubre por encima y se aplasta con mucho cuidado de no romper el cubre.

Una vez preparado, se coloca en el microscopio. Con la mano derecha se controla el movimiento del porta y con la otra el enfoque. Primero hay que hacerlo con pocos aumentos para enfocarlo bien, y después se va cambiando a un aumento mayor.

Las esporas de Tuber melanosporum son  como las de la foto:

-        Son marrones, cuanto más maduras están más oscuras son.

-        Ovaladas.

-        Presentan unas espinas por fuera.

-        Tamaño muy variable, de 28-48 x 20-30 µm

-        Se agrupan en ascas, con un número máximo de cuatro esporas por asca.

·         IDENTIFICACIÓN DE MICORRIZAS

Hay que comprobar si la raíz está micorrizada.

Primero se limpia la raíz con agua, y se quita la tierra con mucho cuidado de no romperla. Una vez limpia se coloca en una bandeja para verla con la lupa. La lupa tiene varios focos para iluminar mejor lo que vamos a observar.

En los ápices de la raíz o pelos radicales, se pueden presentar engrosamientos, es decir, la raíz va de menos a más en vez de al contrario. Eso es una micorriza A veces el micelio cubre todo el ápice.

Cada hongo asociado a las raíces forma una micorriza diferente, lo que sirve para identificar de qué hongo se trata.

Para que se pueda decir que un vivero produce trufa (u otro hongo) con calidad, el 30% de la raíz debe estar micorrizada. Para ello debe analizarse la raíz entera e ir haciendo una relación entre ápices micorrizados y ápices no micorrizados, lo que es bastante costoso y largo.

El problema es que pueden aparecer micorrizas contaminantes, es decir, micorrizas que no pertenecen a la trufa. Para decir que es de calidad, debe además presentar menos del 30% de contaminantes. Para comprobar si una micorriza es de contaminante o de Tuber melanosporum, se puede pasar al microscopio. Las características principales de la micorriza de trufa negra son:

-        Las hifas* que salen de la micorriza se ramifican en ángulo recto.

-        El manto de la micorriza tiene aspecto de puzle; sin embargo, el de los contaminantes tiene forma poligonal. Puede tener micorrizas de otros hongos, como de Lactarius deliciosus (níscalo), las cuales son naranjas, igual que el cuerpo fructífero*

Cuando un ápice no está micorrizado, las células que se ven al microscopio son más grandes y cuadradas.

Al finalizar la primera parte de la sesión, Jaime nos ha mandado buscar en casa el siguiente ejercicio:

Descripción de las esporas de Tuber aestivum y Tuber indicum:

-        Tuber aestivum: Sus esporas son amarillas, translúcidas, elipsoidales a subglobosas, retículo-alveoladas y con crestas de 3-5 µm de altura. El retículo está poco desarrollado y los alveolos son irregulares y frecuentemente abiertos, en número de 3-5 alveolos por longitud mayor de espora y con crestas secundarias. Tamaño muy variable, de 20-45 x 18-35 µm, dependiendo del número de esporas contenido en el asco.

-       Tuber indicum: Son marrones oscuras, muy opacas cuando están completamente maduras. Se agrupan en ascas de 1-5 esporas, generalemente 4. Tienen una forma elipsoidal, pero son menos alargadas que las esporas de Tuber melanosporum, y están decoradas con espinas gruesas, de una altura de 3-5 µm, frecuentemente curvadas en su punta y con una base muy ancha, de 1-3 µm. Cuando la trufa comienza a madurar, estas espinas forman un retículo incompleto que se va haciendo menos evidente según madura la espora. Tamaño muy variable incluso en el interior de un mismo asco, de 22-38 x 20-32 µm.

LABORATORIO DE CULTIVO

La segunda parte de la sesión la hemos pasado en el laboratorio de cultivo. En él podemos encontrarnos los siguientes instrumentos:

-        Báscula.

-        Báscula de precisión, con hasta 4 decimales.

-        Pipetas de tres tipos.

-        Pesas para calibrar las básculas.

-        Agitador y calentador (Que consiste en una placa magnética sobre la cual se coloca la disolución con una pastilla magnética. Al encenderlo hacemos dar vueltas a la pastilla que agita, mezcla la disolución).

-        PH-metro: Mide el PH.

-        Agua destilada.

-        Cámara de flujo laminar vertical: Se usa para trabajar de forma aséptica, sin ningún contaminante. Hay que limpiarla con alcohol antes de cada uso y dentro de ella usar guantes, excepto cuando se manipule con el mechero.

Su mecanismo consiste en lo siguiente:

-        Mechero y mechero Bunsen: Dentro de la cámara de flujo.

-        Sellador: Dentro de la cámara de flujo.

-        Autoclaves: Actúan como una olla a presión, para calentar durante x tiempo.

PRINCIPIOS DEL CULTIVO DE HONGOS: Para Boletus o Shiitake (no para trufa)

Deben seguirse una serie de pasos:

1.      Encender cámara de flujo laminar 10 minutos antes de usarla y limpiarla con alcohol.

2.      Ponerse los guantes

3.      Esterilizar bisturí con alcohol y mechero.

4.      Se corta un triangulito del micelio del hongo. Si está sucio se limpia con agua destilada.

5.      Se lleva a su medio de cultivo. Por ejemplo, el medio de cultivo de los saprófitos es el MMN a PH 5,5.

6.      Se cubre con tiras de parafilm y así ya se puede sacar de la cámara de flujo laminar sin que se contamine.

7.      Una vez aislados se llevan a incubar a los armarios con unas condiciones de temperatura determinadas.

8.      Depende el hongo que sea, se coloniza antes o después. Por ejemplo el boletus tarda bastante en colonizar.

9.      Cuando está bien preparado y colonizado se mete en la cámara laminar de nuevo y se reparte el micelio en otras placas, a veces con ayuda de un sacabocados.

10.  Cuando se tiene bastante micelio se crea un sustrato con turba, vermiculita y además un medio con nutrientes (como MNM)

11.  El sustrato se esteriliza en el autoclave.

12.  Se coge el micelio de los bordes de la placa, pues es el que está más reciente y se inocula en la bolsa.

13.  Se sella en el sellador de la cámara de flujo.

14.  Se lleva al otro laboratorio y se deja un tiempo, depende del hongo. Un ejemplo de este tiempo, son 3 meses.

LECTURA DE ARTÍCULOS CIENTÍFICOS EN INGLÉS

Al final de la sesión nos han repartido un artículo científico en inglés, y nos han explicado la estructura que suelen presentar. Suelen constar de una introducción, después la metodología empleada para el estudio del tema, a continuación una relación con otros artículos relacionados y finalmente una conclusión.




Cuanto antes añadiré las fotos que tomamos de la sesión.