LABORATORIO DE
CULTIVO
MEDIOS DE CULTIVO
Preparamos MMN (para hongos
micorrícicos como el Boletus) en un Erlenmeyer.
-Glucosa 10g
-Sulfato de magnesio MgSO4 0.15g
-Fosfato de amonio (NH4)2HPO2 0.5g.
-Dihidrógenofosfato de potasio KH2PO4 0.5g
-Cloruro cálcico CaCl2 0.05g
-Agar 15g
-Cloruro sódico NaCl 0.02g
-Cloruro férrico FeCl3 1.2ml à (como está en estado líquido, para cogerlo utilizamos una pipeta)
-Tiamina 1ml à (como está en estado líquido, para cogerlo utilizamos una pipeta)
-Agua 1L à (se utiliza un matraz aforado para coger la cantidad exacta)
Cuando están todos los componentes en el Erlenmeyer, se echa un imán en la
mezcla y se coloca en el agitador para que se junte todo, al removerse.
Cuando la mezcla está removida, se mide su pH. El pH del MMN tiene que ser 5.5. Para medirlo, metemos el pH-metro y vamos añadiendo poco a poco gotas de ácido clorhídrico con ayuda de una pipeta, hasta que llegue a 5.5. El pH-metro debe calibrarse cada 7 días. Para calibrarlo, usamos unos tampones con un pH determinado.
A continuación se mete la mezcla en el autoclave, que
funciona como una olla a presión, y aquí se calienta. (Nosotros no hemos hecho este paso por su larga duración)
AISLAMIENTO
Utilizamos el medio de cultivo
PDA para aislar Shiitake
Primero se coge la placa de
petri, que posee una base gelatinosa de agar y se corta un trocito de la basecon forma de
triángulo.
Se coge la seta, se corta un
triangulo poco profundo con el bisturí y se introduce en la placa de petri, en
el espacio donde hemos cortado el triángulo de agar.
Después, la placa se rodea con
film para aislarla y que no entre nada.
Por último cada placa se identifica.
Se escribe IDF (IDForest) + la fecha al revés + el número de cepa + la
fecha. Ejemplo: IDF140304151 04-03-14
En el centro de la foto podemos observar el resultado final que debería salir a partir de las placas del borde, que son las que hemos hecho nosotros
REPICACIÓN
TAREA
La tarea de esta sesión es buscar el significado de cepa:
Cepa: Grupo de organismos dentro de una especie o variedad.
En una planta, parte enterrada del tronco que está unida a las raíces.
Cepa Bacteriana: Colonia microbiana procedente de un solo germen obtenido de un enfermo, y multiplicado por pases sucesivos en diferentes medios de cultivo.
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