domingo, 9 de marzo de 2014

Segunda sesión. Martes 4 de marzo

El martes 4 de marzo hemos tenido nuestra segunda sesión. Ha sido menos teórica que la primera, ya que nos hemos centrado más en crear cultivos, inocular y repicar. La sesión de hoy la hemos realizado únicamente en laboratorio de cultivo.


LABORATORIO DE CULTIVO

 

MEDIOS DE CULTIVO

 
Preparamos MMN (para hongos micorrícicos como el Boletus) en un Erlenmeyer.

 
COMPONENTES (para 1L):

 
-Malta 3g
-Glucosa 10g
-Sulfato de magnesio MgSO4   0.15g
-Fosfato de amonio (NH4)2HPO2  0.5g.
-Dihidrógenofosfato de potasio KH2PO4   0.5g
-Cloruro cálcico CaCl2  0.05g
-Agar 15g
-Cloruro sódico NaCl  0.02g
-Cloruro férrico FeCl3  1.2ml à (como está en estado líquido, para cogerlo utilizamos una pipeta)
-Tiamina 1ml à (como está en estado líquido, para cogerlo utilizamos una pipeta)
-Agua 1L à (se utiliza un matraz aforado para coger la cantidad exacta)

 
Cuando están todos los componentes en el Erlenmeyer, se echa un imán en la mezcla y se coloca en el agitador para que se junte todo, al removerse.

Cuando la mezcla está removida, se mide su pH. El pH del MMN tiene que ser 5.5. Para medirlo, metemos el pH-metro y vamos añadiendo poco a poco gotas de ácido clorhídrico con ayuda de una pipeta, hasta que llegue a 5.5. El pH-metro debe calibrarse cada 7 días. Para calibrarlo, usamos unos tampones con un pH determinado.
 

 

A continuación se mete la mezcla en el autoclave, que funciona como una olla a presión, y aquí se calienta. (Nosotros no hemos hecho este paso por su larga duración)

 La mezcla es líquida, pero después, debido al agar se solidifica y entonces ya está listo.

  

AISLAMIENTO

Utilizamos el medio de cultivo PDA para aislar Shiitake

 
Primero se coge la placa de petri, que posee una base gelatinosa de agar y se corta un trocito de la basecon forma de triángulo.

Se coge la seta, se corta un triangulo poco profundo con el bisturí y se introduce en la placa de petri, en el espacio donde hemos cortado el triángulo de agar.

Después, la placa se rodea con film para aislarla y que no entre nada.

Por último cada placa se identifica. Se escribe IDF (IDForest) + la fecha al revés + el número de cepa + la fecha.  Ejemplo: IDF140304151 04-03-14

 


 En el centro de la foto podemos observar el resultado final que debería salir a partir de las placas del borde, que son las que hemos hecho nosotros


REPICACIÓN

 
Cuando el micelio crece, se repica con un sacabocados para colocarlo en otras placas y que siga creciendo. La repicación consiste en separar pequeños trozos del micelio con ayuda de este instrumento circular (sacabocados), transportarlos con ayuda de un bisturí, y colocarlos en  nuevas placas de petri con agar. Estos trozos se separan siempre de la periferia del micelio, ya que es el más reciente y se dan la vuelta para colocarlos encima del agar. Este proceso se repite tres veces para obtener tres trocitos en cada placa de petri, y después se sella con film. Por último se identifica exactamente igual que la placa de la que procede, pero se cambia la fecha y se almacena a una temperatura de 20ºC

 
 
 
TAREA
 
La tarea de esta sesión es buscar el significado de cepa:
 

Cepa: Grupo de organismos dentro de una especie o variedad.
En una planta, parte enterrada del tronco que está unida a las raíces.
 
Cepa Bacteriana: Colonia microbiana procedente de un solo germen obtenido de un enfermo, y multiplicado por pases sucesivos en diferentes medios de cultivo.

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