En la primera sesión hemos recibido mucha información sobre
las líneas de trabajo de IDForest y sobre el mundo Fungi. Hemos conocido más a
fondo el instrumental y los laboratorios con los que cuenta la empresa, así
como hemos aprendido a utilizar algunos de ellos.
Más específicamente hemos aprendido a identificar las esporas
de la trufa negra y sus micorrizas de manera teórica y después práctica.
LÍNEAS DE TRABAJO
La empresa
IDForest se centra fundamentalmente en tres líneas de trabajo, aunque no se
cierra puertas a nuevas propuestas. Las líneas principales son:
·
1ª
LÍNEA: Tuber melanosporum (trufa negra)
micorrizada con Quercus ilex
(Encina): La trufa se micorriza* con la encina. Se comprueban que las esporas y
las micorrizas pertenecen realmente a la trufa negra realmente, pues las
diferencias con otras son abismales (tanto gastronómicas como económicas)
·
2ª
LÍNEA: Boletus edulis micorrizada en Cistus ladanifer (Jara pringosa): Las
Boletus se micorrizan con las jaras, y tardan en fructificar de 5 a 6 años.
·
3ª
LÍNEA: Lentinus edodes, conocida como
Shiitake, un hongo sapófito* con propiedades medicinales que ya se ha dado a conocer
en revistas generalistas.´
Cada hongo
se cultiva de distinta forma:
·
Boletus edulis: Para cultivarlo hay que aislar el
micelio puro, con sus sutratos, nutrientes…
·
Tuber melanosporum: Sólo hacen falta sus esporas, las
cuales se extraen del cuerpo fructífero.
·
En
los hongos saprófitos sólo se puede usar el micelio. Si se usan las esporas se
contamina el medio.
La empresa
de Venta de baños está dividida en varios laboratorios:
LABORATORIO ÓPTICO
En él se
encuentran el microscopio, la lupa y un ordenador en el que se puede ver lo que
estás aumentando con los dos primeros instrumentos.
Hay además
una máquina llamada “Real Time PCR”, que
aumentando la cantidad de ADN mediante la reacción en cadena de la
polimerasa, permite identificar el hongo (o cualquier otro ser vivo) del que se
trata. Si quieres averiguar si en un suelo hay o no el micelio que buscas, lo
preparas y en una hora más o menos no solo tienes ese resultado, sino que
también lo cuantifica.
Hay otros
instrumentos, como una nevera, en la que se guardan algunas preparaciones.
Tuber melanosporum: TRUFA NEGRA
Hoy en este
laboratorio nos han enseñado tres trufas negras que Jaime y su compañera Olaya
Mediavilla, (jefa de laboratorio y acabando su tesis doctoral, que ha estado
con nosotros las tres horas) han traído de la feria de la trufa de Soria en
Abejar. Las Tuber melanosporum son
negras por dentro y por fuera, y si las partimos a la mitad el aspecto nos
recuerda al del cerebro. Su olor es fortísimo, de hecho, hemos podido olerlas
cuando hemos entrado en el laboratorio (y se encontraban envueltas dentro de un
tuper). En cuanto a si nos gustaba cómo olía o no, había discrepancias. Todos
coincidíamos en que es un olor completamente distinto al resto, nunca habíamos
olido nada parecido. Todas estas características son las que hacen que esté tan
cotizada, y que además, con una sola trufa se puede dar sabor a muchísimos
platos, se puede trufar* cualquier alimento.
Hay más
tipos de trufa, como la Tuber aestivum
o la Tuber indicum (o trufa china).
Es muy importante saber identificarlas bien, pues tanto su calidad
organoléptica como su precio varían abismalmente.
Por ello,
hemos aprendido a identificar las esporas de la trufa negra, y el tipo de
micorriza que forma con las raíces de los árboles. El precio de una encina de
unos 10-15 cm de alto varía de 60 céntimos sin estar micorrizada por la trufa
negra a unos 6€ estándolo. Muchos viveristas envían a IDForest pequeñas encinas
antes de plantarlas para comprobar si están o no micorrizadas, y por tanto, si
van a dar (grandes) beneficios.
·
IDENTIFICACIÓN DE ESPORAS
Para ver e
identificar una espora es necesario utilizar el microscopio. Primero se
prepara: Se coge un poquito de trufa triturada mezclada con agua, o un trocito
muy pequeño de trufa a la que se le añade una gotita de agua una vez colocado
en el porta. Se coloca un cubre por encima y se aplasta con mucho cuidado de no
romper el cubre.
Una vez
preparado, se coloca en el microscopio. Con la mano derecha se controla el
movimiento del porta y con la otra el enfoque. Primero hay que hacerlo con
pocos aumentos para enfocarlo bien, y después se va cambiando a un aumento
mayor.
Las esporas
de Tuber melanosporum son como las de la foto:
-
Son
marrones, cuanto más maduras están más oscuras son.
-
Ovaladas.
-
Presentan
unas espinas por fuera.
-
Tamaño
muy variable, de 28-48 x 20-30 µm
-
Se
agrupan en ascas, con un número máximo de cuatro esporas por asca.
·
IDENTIFICACIÓN DE MICORRIZAS
Hay que
comprobar si la raíz está micorrizada.
Primero se
limpia la raíz con agua, y se quita la tierra con mucho cuidado de no romperla.
Una vez limpia se coloca en una bandeja para verla con la lupa. La lupa tiene
varios focos para iluminar mejor lo que vamos a observar.
En los
ápices de la raíz o pelos radicales, se pueden presentar engrosamientos, es
decir, la raíz va de menos a más en vez de al contrario. Eso es una micorriza A
veces el micelio cubre todo el ápice.
Cada hongo
asociado a las raíces forma una micorriza diferente, lo que sirve para
identificar de qué hongo se trata.
Para que se
pueda decir que un vivero produce trufa (u otro hongo) con calidad, el 30% de
la raíz debe estar micorrizada. Para ello debe analizarse la raíz entera e ir
haciendo una relación entre ápices micorrizados y ápices no micorrizados, lo
que es bastante costoso y largo.
El problema
es que pueden aparecer micorrizas contaminantes, es decir, micorrizas que no
pertenecen a la trufa. Para decir que es de calidad, debe además presentar
menos del 30% de contaminantes. Para comprobar si una micorriza es de
contaminante o de Tuber melanosporum,
se puede pasar al microscopio. Las características principales de la micorriza
de trufa negra son:
-
Las
hifas* que salen de la micorriza se ramifican en ángulo recto.
-
El
manto de la micorriza tiene aspecto de puzle; sin embargo, el de los
contaminantes tiene forma poligonal. Puede tener micorrizas de otros hongos,
como de Lactarius deliciosus
(níscalo), las cuales son naranjas, igual que el cuerpo fructífero*
Cuando un ápice no está micorrizado, las células que se ven al
microscopio son más grandes y cuadradas.
Al finalizar
la primera parte de la sesión, Jaime nos ha mandado buscar en casa el siguiente
ejercicio:
Descripción
de las esporas de Tuber aestivum y Tuber indicum:
-
Tuber aestivum: Sus esporas son amarillas,
translúcidas, elipsoidales a subglobosas, retículo-alveoladas y con crestas de
3-5 µm de altura. El retículo está poco desarrollado y los alveolos son
irregulares y frecuentemente abiertos, en número de 3-5 alveolos por longitud
mayor de espora y con crestas secundarias. Tamaño muy variable, de 20-45 x
18-35 µm, dependiendo del número de esporas contenido en el asco.
- Tuber indicum: Son marrones
oscuras, muy opacas cuando están completamente maduras. Se agrupan en ascas de
1-5 esporas, generalemente 4. Tienen una forma elipsoidal, pero son menos
alargadas que las esporas de Tuber melanosporum, y están decoradas con espinas
gruesas, de una altura de 3-5 µm, frecuentemente curvadas en su punta y con una
base muy ancha, de 1-3 µm. Cuando la trufa comienza a madurar, estas espinas
forman un retículo incompleto que se va haciendo menos evidente según madura la
espora. Tamaño muy variable incluso en el interior de un mismo asco, de 22-38 x
20-32 µm.
LABORATORIO
DE CULTIVO
La segunda
parte de la sesión la hemos pasado en el laboratorio de cultivo. En él podemos
encontrarnos los siguientes instrumentos:
-
Báscula.
-
Báscula
de precisión, con hasta 4 decimales.
-
Pipetas
de tres tipos.
-
Pesas
para calibrar las básculas.
-
Agitador
y calentador (Que consiste en una placa magnética sobre la cual se coloca la
disolución con una pastilla magnética. Al encenderlo hacemos dar vueltas a la
pastilla que agita, mezcla la disolución).
-
PH-metro:
Mide el PH.
-
Agua
destilada.
-
Cámara
de flujo laminar vertical: Se usa para trabajar de forma aséptica, sin ningún
contaminante. Hay que limpiarla con alcohol antes de cada uso y dentro de ella
usar guantes, excepto cuando se manipule con el mechero.
Su mecanismo consiste en lo siguiente:
-
Mechero
y mechero Bunsen: Dentro de la cámara de flujo.
-
Sellador:
Dentro de la cámara de flujo.
-
Autoclaves:
Actúan como una olla a presión, para calentar durante x tiempo.
PRINCIPIOS DEL CULTIVO DE HONGOS:
Para Boletus o Shiitake (no para trufa)
Deben
seguirse una serie de pasos:
1. Encender cámara de flujo laminar 10
minutos antes de usarla y limpiarla con alcohol.
2. Ponerse los guantes
3. Esterilizar bisturí con alcohol y
mechero.
4. Se corta un triangulito del micelio
del hongo. Si está sucio se limpia con agua destilada.
5. Se lleva a su medio de cultivo. Por
ejemplo, el medio de cultivo de los saprófitos es el MMN a PH 5,5.
6. Se cubre con tiras de parafilm y así
ya se puede sacar de la cámara de flujo laminar sin que se contamine.
7. Una vez aislados se llevan a incubar
a los armarios con unas condiciones de temperatura determinadas.
8. Depende el hongo que sea, se coloniza
antes o después. Por ejemplo el boletus tarda bastante en colonizar.
9. Cuando está bien preparado y
colonizado se mete en la cámara laminar de nuevo y se reparte el micelio en otras
placas, a veces con ayuda de un sacabocados.
10. Cuando se tiene bastante micelio se
crea un sustrato con turba, vermiculita y además un medio con nutrientes (como
MNM)
11. El sustrato se esteriliza en el
autoclave.
12. Se coge el micelio de los bordes de
la placa, pues es el que está más reciente y se inocula en la bolsa.
13. Se sella en el sellador de la cámara
de flujo.
14. Se lleva al otro laboratorio y se
deja un tiempo, depende del hongo. Un ejemplo de este tiempo, son 3 meses.
LECTURA DE ARTÍCULOS CIENTÍFICOS EN
INGLÉS
Al final de
la sesión nos han repartido un artículo científico en inglés, y nos han
explicado la estructura que suelen presentar. Suelen constar de una
introducción, después la metodología empleada para el estudio del tema, a
continuación una relación con otros artículos relacionados y finalmente una
conclusión.
Cuanto antes añadiré las fotos que tomamos de la sesión.
Posteriormente Jaime nos explicó el funcionamiento de la PCR, que detecta en tiempo real una cadena de ADN única de un organismo o individuo, dando los resultados con gran rapidez, en 1 hora y media. La máquina busca una secuencia de ADN mediante ciclos de distintas temperaturas (termocicladora). La PCR tiene 98 pocillos, 4 de los cuales son controles, 2 negativos con agua destilada y 2 positivos con muestras reales de lo que se busca, por ejemplo boletus, y por tanto, puedes introducir 94 muestras y hay que indicar la cantidad de pocillos que contienen muestras.
